HEPENGBIO組織鈣調(diào)蛋白（CaM）活性酶連續(xù)循環(huán)反應(yīng)光度法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品
說(shuō)明書(shū)
主要用途
HEPENGBIO組織鈣調(diào)蛋白（CaM）活性酶連續(xù)循環(huán)反應(yīng)光度法定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過(guò)鈣調(diào)蛋白依賴(lài)性cAMP磷酸二酯酶、肌激酶、丙酮酸激酶和乳酸脫氫酶的酶連續(xù)反應(yīng)系統(tǒng)中還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）氧化后吸光峰值的降低，即采用光度法來(lái)測(cè)定組織裂解樣品中鈣調(diào)蛋白活性的方法。其適用于各種組織裂解懸液樣品（動(dòng)物、人體、昆蟲(chóng)等）鈣調(diào)蛋白的活性，以及抑制劑和調(diào)節(jié)劑檢測(cè)。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌，即到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定。
技術(shù)背景
鈣調(diào)蛋白（calmodulin；CaM）屬于鈣結(jié)合蛋白家屬中EF手型（EF hand）蛋白類(lèi)之一，在所有真核細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，分布在各種不同的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)中。鈣調(diào)蛋白是一種熱穩(wěn)定小分子酸性蛋白，含有148氨基酸，16.7Kd大小，4個(gè)EF手型模式（motif）。鈣調(diào)蛋白通過(guò)EF手型，與鈣離子結(jié)合，產(chǎn)生構(gòu)型變化，進(jìn)而與各種蛋白結(jié)合，或反之，其它蛋白通過(guò)結(jié)合鈣調(diào)蛋白形成復(fù)合物結(jié)合鈣離子，引起一系列信號(hào)反應(yīng)機(jī)制，調(diào)節(jié)機(jī)體內(nèi)炎癥反應(yīng)、代謝、凋亡、平滑肌收縮、胞內(nèi)運(yùn)動(dòng)、短時(shí)或長(zhǎng)時(shí)記憶、神經(jīng)生長(zhǎng)和免疫反應(yīng)等，更是鈣離子感受器和調(diào)控緩沖分子?；谙佘?3',5'-環(huán)化一磷酸磷酸二酯酶（cyclic adenine monophosphate phosphodiesterase；cAMP PDE；EC3.1.4.17 ）是鈣調(diào)蛋白依賴(lài)性。鈣調(diào)蛋白激活磷酸二酯酶催化環(huán)核苷酸（cAMP）的磷酸二酯鍵（phosphodiester bond）的水解，產(chǎn)生1-磷酸腺苷，進(jìn)而通過(guò)肌激酶（myokinase）、 丙酮酸激酶（pyruvate kinase）和乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase）系統(tǒng)，測(cè)定還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（reduced nicotinamide adenine dinucleotide；NADH）轉(zhuǎn)化為氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（oxidized nicotinamide adenine dinucleotide；NAD）的吸光峰值的變化（340nm 波長(zhǎng)），來(lái)定量分析鈣調(diào)蛋白的活性。其連續(xù)循環(huán)反應(yīng)系統(tǒng)為：
 
     phosphodiesterase 
cAMP  +  H2O     →      AMP  
calmodulin
 
myokinase
AMP  +  ATP  →  2 ADP
 
pyruvate kinase
2 ADP  + 2 phosphoenolpyruvate   →    2 ATP  +  2 pyruvate   
 
lactate dehydrogenase 
2 pyruvate  +  2 NADH    →  2 lactate  +  2 NAD＋ 
（高吸收峰） （低吸收峰）
產(chǎn)品內(nèi)容
HEPENGBIO清理液（Reagent A）     60毫升
HEPENGBIO裂解液（Reagent B）     10毫升
HEPENGBIO緩沖液（Reagent C）     10毫升
HEPENGBIO反應(yīng)液（Reagent D）     500微升
HEPENGBIO酶促液（Reagent E）     500微升
HEPENGBIO底物液（Reagent F）   250微升
HEPENGBIO陰性液（Reagent G）   500微升
產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)         1份
 
保存方式
 
保存HEPENGBIO清理液（Reagent A）保存在4℃冰箱里；其余的保存在－20℃冰箱里；HEPENGBIO反應(yīng)液（Reagent D）避免光照；有效保證6月
 
用戶(hù)自備
 
1.5毫升離心管：用于樣品保存的容器
15毫升錐形離心管：用于樣品制備的容器
DOUNCE勻漿器：用于細(xì)胞勻化
（微型）臺(tái)式離心機(jī)：用于樣品操作
200微升1厘米光徑比色皿或96孔板：用于光度分析的容器
分光光度儀或酶標(biāo)儀：用于光度分析