精子（spermatozoa）分析提供了精子生成（spermatogenesis）、精子壽命、以及生育能力的基礎信息。其中精子的活力（vitality）、運動能力（motility）、授精潛力（fertilizing potential）、膜結構或染色質結構完整性（integrity）、頂體反應（acrosomal reaction）功能的評價是精子分析的重要指標，也是決定人工受孕或體外授精（in vitro fertilization；IVF）的重要參數(shù)。其中質膜完整性（membrane integrity）是精子授精能力的標志，反映精子膜功能狀態(tài)。結構完整和功能活化的質膜是精子細胞代謝、獲能頂體反應、附著和穿越卵細胞等生理活動所必需的。使用SYBR14和碘化丙啶（Propidium Iodide；PI）雙重熒光染色，是精子質膜完整性分析的最常用的方法。首先使用SYBR14染色，基于其可以自由穿越活體且質膜完好的精子細胞，與核內核酸結合的特點，顯示質膜完整性。而碘化丙啶受到質膜完整的活體精子細胞（包括游動性和非游動性精子）的排斥，而容易進入破損或死亡精子細胞，表明質膜損傷。雙染的作用，以幫助區(qū)分質膜結構完整性與否。通過常用的熒光顯微鏡，便可清晰觀察到質膜狀態(tài)（status）。  
產(chǎn)品內容
HEPENGBIO保存液（Reagent A）  毫升
HEPENGBIO染色液A（Reagent B）  微升
HEPENGBIO染色液B（Reagent C）  微升
產(chǎn)品說明書  1份
保存方式
保存在－20℃冰箱里；HEPENGBIO染色液A和B（Reagent B和C）避免光照，有效保證6月
用戶自備
1.5毫升離心管：用于樣品操作的容器
微型臺式離心機：用于樣品染色操作的容器
血細胞計數(shù)器：用于細胞計數(shù)
載玻片和蓋玻片：用于精子細胞爬片
（共聚焦）熒光顯微鏡：用于觀察染色的精子細胞  
實驗步驟
1． 移取新鮮獲得的1毫升精液（48小時內）到1.5毫升離心管
2． 放進37℃培養(yǎng)箱孵育30分鐘
3． 放進微型臺式離心機離心5分鐘，速度為600g
4． 小心抽去上清液
5． 加入xx毫升HEPENGBIO保存液（Reagent A），混勻顆粒群
6． 在血細胞計數(shù)器上進行精子細胞計數(shù)，并調整到2 X 10⁷精子細胞/毫升
7． 移取100微升精子細胞到新的1.5毫升離心管
8． 加入xx微升HEPENGBIO染色液A（Reagent B），混勻
9． 37℃溫度下孵育10分鐘，避免光照
10． 小心加入xx微升HEPENGBIO染色液B（Reagent E），混勻
11． 37℃溫度下孵育10分鐘，避免光照
12． 移取50微升到載玻片上
13． 小心抽去染色液
14． 蓋上蓋玻片
15． 即刻在（共聚焦）熒光顯微鏡下觀察并計數(shù)（注意：每個視野計數(shù)200個精子）
觀察綠色熒光—HEPENGBIO染色液B（Reagent E）：濾波器激發(fā)波長490nm，散發(fā)波長520nm
觀察紅色熒光—HEPENGBIO染色液A（Reagent B）：濾波器激發(fā)波長：488nm；散發(fā)波長：630nm 
16． 分析結果

分類	染色結果	意義
I	整個精子頭部呈現(xiàn)明亮綠色熒光	質膜完整（intact）
II	整個或部分精子頭部呈現(xiàn)紅色熒光	質膜完全損傷（damaged）
III	整個精子頭部呈現(xiàn)橘黃色熒光	質膜損傷

 
注意事項
1． 本產(chǎn)品為20次操作
2． 操作時須戴手套
3． 樣品檢測前，建議在血細胞計數(shù)器上進行精子細胞計數(shù)
4． 精子細胞計數(shù)時乘上稀釋倍數(shù)10⁴。標準血細胞計數(shù)器（Hemocytometer）的計算方法是：
1毫米方塊的細胞計數(shù)X 10⁴（稀釋倍數(shù)）＝實際細胞數(shù)/毫升
5． 染色完成后，即刻進行檢測分析
6． 本公司提供系列發(fā)育生物學相關檢測試劑產(chǎn)品