注意：正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。測(cè)定意義
FDA 水解反應(yīng)能很好的反應(yīng)土壤中微生物活性和土壤質(zhì)量的變化以及生態(tài)系統(tǒng)中有機(jī)質(zhì)的轉(zhuǎn)化，是土壤質(zhì)量研究中的重要生物學(xué)指標(biāo)之一。
測(cè)定原理
FDA 是一種無色化合物，在介質(zhì)中能被許多土壤酶所催化水解，并經(jīng)脫水反應(yīng)，產(chǎn)生酶解終產(chǎn)物熒光素，穩(wěn)定不易被分解，并在 490nm 處有強(qiáng)吸收峰，通過檢測(cè) 490nm 處的吸光值變化可計(jì)算得FDA 水解酶活性。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器
天平、低溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板、恒溫水浴鍋。
試劑組成和配制
標(biāo)準(zhǔn)液：液體 4mL×1 瓶，4℃保存。試劑一：液體 40mL×1 瓶，4℃保存。
試劑二：粉劑 1 瓶，-20℃避光保存，臨用前加 4mL 試劑三溶解。試劑三：液體 40mL×1 瓶，4℃保存。
樣本處理
稱取風(fēng)干過 30-50 目篩土壤約 0.1g，備用。
測(cè)定操作表
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空白管 |
標(biāo)準(zhǔn)管 |
對(duì)照管 |
測(cè)定管 |
| 樣本（g） |
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0.05 |
0.05 |
| 標(biāo)準(zhǔn)液（μL） |
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40 |
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| 雙蒸水（μL） |
40 |
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| 試劑一（μL） |
200 |
200 |
240 |
200 |
| 試劑二（μL） |
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40 |
| 充分混勻，30℃，震蕩 1h |
| 試劑三（μL） |
160 |
160 |
160 |
160 |
10000g，25℃，離心 5min，取 200μL 上清于微量石英比色皿/96 孔板中測(cè)定 490nm 處吸
光值A(chǔ)，△A1=A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管，△A2=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管 |
注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。酶活性計(jì)算公式
a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
酶活性定義：每克土壤每天產(chǎn)生 1μmol 熒光素的量為一個(gè)酶活力單位。
S-FDA 活性（μmol/d/g 土樣）=（△A2÷△A1×C 標(biāo)準(zhǔn)品）×V 反總÷W
= 0.96×（△A2÷△A1）÷W
b. 用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
酶活性定義：每克土壤每天產(chǎn)生 1μmol 熒光素的量為一個(gè)酶活力單位。
S-FDA 活性（μmol/d/g 土樣）=（△A2÷△A1×C 標(biāo)準(zhǔn)品）×V 反總÷W
= 0.96×（△A2÷△A1）÷W
C 標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品濃度 100μmol/L；V 反總：反應(yīng)總體積，0.4mL；W：樣本質(zhì)量，g
