規(guī)格：100 管/96 樣
苯丙氨酸解氨酶（e Phenylalnine ammonialyase ， PAL ）試劑盒說明書
微量法
正式測定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義
PAL（EC4.3 1 5）廣泛存在于各種植物和少數(shù)微生物中，是植物體內(nèi)苯丙烷類代謝的關(guān)鍵
酶，與一些重要的次生物質(zhì)如木質(zhì)素、異黃酮類植保素、黃酮類色素等合成密切相關(guān)，在植物正常生長發(fā)育和抵御病菌侵害過程中起重要作用。
測定原理
PAL催化L-苯丙氨酸裂解為反式肉桂酸和氨，反式肉桂酸在290nm處有最大吸收值，通過測
定吸光值升高速率計(jì)算PAL活性。
所需的儀器和用品
紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔
板(UV板)、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制
提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體 15mL×1 瓶，4℃保存。
試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前加入4mL 蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑 4℃
保存一周；
試劑三：液體 1mL×1 瓶，4℃保存。
粗酶液提取
按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL
提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。10000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
測定步驟
1、 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至290nm，蒸餾水調(diào)零。
PAL 活性計(jì)算
用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下
（1） 按蛋白濃度計(jì)算
單位定義：每mg組織蛋白在每mL反應(yīng)體系中每min使290nm下吸光值變化0.1為一個(gè)酶活性單
位。
PAL（U/mg prot）=ΔA×V 反總÷（Cpr×V 樣）÷0.1÷T =13.3×ΔA÷Cpr
（2） 按樣本鮮重計(jì)算
單位定義：每g組織在每mL反應(yīng)體系中每min使290nm下吸光值變化0.1為一個(gè)酶活性單位。
PAL（U/g 鮮重）＝ΔA×V 反總÷(W× V 樣÷V 樣總)÷0.1÷T =13.3×ΔA÷W
V 反總：反應(yīng)體系總體積，0.2mL；V 樣：加入樣本體積，0.005mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，30 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g。
用 96 孔板測定的計(jì)算公式如下
（1） 按蛋白濃度計(jì)算
單位定義：每mg組織蛋白在每mL反應(yīng)體系中每min使290nm下吸光值變化0.05為一個(gè)酶活性單位。PAL（U/mg prot）=ΔA×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷0.05÷T =26.6×ΔA÷Cpr
（2） 按樣本鮮重計(jì)算單位定義：每g組織在每mL反應(yīng)體系中每min使290nm下吸光值變化0.05為一個(gè)酶活性單位。PAL（U/g 鮮重）＝ΔA×V 反總÷(W× V 樣÷V 樣總)÷0.05÷T =26.6×ΔA÷W
V 反總：反應(yīng)體系總體積，0.2mL； V 樣：加入樣本體積，0.005mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，30 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g。
